Флуоресцентные зонды CRISPR с активируемым свечением обеспечивают высокоточную визуализацию генома в живых клетках
Ученые обобщили новейшие достижения в области флуоресцентных CRISPR-зондов, которые «включаются» только при связывании с ДНК, что позволяет получать изображения генома в живых клетках с высоким разрешением и низким уровнем фонового шума
Short Summary
Исследователи из Китайской академии наук систематизировали и оценили последние достижения в области флуоресцентных CRISPR-зондов с активируемым свечением, которые революционизируют визуализацию ДНК в живых клетках. Эти зонды светятся только при связывании с целевой последовательностью ДНК, что кардинально решает проблему высокого фонового сигнала, присущую традиционным «постоянно светящимся» инструментам.
В обзоре подробно описаны четыре основные стратегии создания таких зондов с низким уровнем шума: на основе флуоресцентных белков с активируемым свечением, флуоресцентных РНК-аптамеров, расщеплённых флуоресцентных белков и молекулярных маяков. Все они используют подход с РНК-зондом, который интегрирован в систему CRISPR, что обеспечивает высокую специфичность и контрастность изображения.
Технология уже успешно применяется для визуализации, в том числе одно-копийных последовательностей, в различных человеческих клетках, позволяя изучать движение хромосом, оценивать длину теломер и анализировать наноструктуру хроматина в сочетании с микроскопией сверхвысокого разрешения. Она открывает новые возможности для фундаментальных исследований в биологии хроматина, изучения механизмов заболеваний и разработки методов лечения.
Решена проблема фонового шума
Новые зонды светятся только при связывании с ДНК, в отличие от традиционных «постоянно светящихся» CRISPR-инструментов, что резко повышает отношение сигнал/шум
Четыре ключевые стратегии
Разработаны и систематизированы четыре подхода к созданию зондов: на основе активируемых белков, РНК-аптамеров, расщеплённых белков и молекулярных маяков
Широкий спектр применений
Технология позволяет визуализировать одно-копийные гены, оценивать длину теломер, изучать наноструктуру хроматина и отслеживать несколько геномных локусов одновременно
Интеграция с передовыми методами
Зонды совместимы с микроскопией сверхвысокого разрешения и светлопольной микроскопией, что позволяет проводить длительные наблюдения с низкой фототоксичностью
Text generated using AI
