Test

Разработка и валидация методики количественного определения моноаминовых нейромедиаторов и их метаболитов в тканях мозга крыс с помощью ВЭЖХ-МС/МС

Обоснование. Определение изменения содержания моноаминовых нейромедиаторов и&nbsp;их&nbsp;метаболитов в&nbsp;структурах головного мозга является необходимой частью изучения фармакодинамики противопаркинсонических лекарственных средств. Методика совместного определения норадреналина, адреналина, допамина, серотонина, 5-гидроксииндол-3-уксусной кислоты, 3,4-дигидроксифенилуксусной кислоты, гомованилиновой кислоты, ванилилминдальной кислоты в&nbsp;тканях мозга крыс ранее не&nbsp;была разработана.Цель исследования. Разработка и&nbsp;валидация методики количественного определения норадреналина, адреналина, допамина, серотонина, 5-гидроксииндол-3-уксусной кислоты, 3,4-дигидроксифенилуксусной кислоты, гомованилиновой кислоты, ванилилминдальной кислоты в&nbsp;тканях мозга крыс с&nbsp;помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в&nbsp;сочетании с&nbsp;тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС).Методы. Методика определения моноаминовых медиаторов и&nbsp;их&nbsp;метаболитов разработана c&nbsp;применением метода ВЭЖХ-МС/МС. Гомогенаты тканей мозга готовились с&nbsp;помощью механического ручного гомогенизатора. Изучено влияние различных антиоксидантов на&nbsp;стабильность норадреналина, адреналина, допамина и&nbsp;3,4-дигидроксифенилуксусной кислоты в&nbsp;испытуемых образцах.Результаты. Хроматографическое разделение компонентов пробы осуществлялось с&nbsp;помощью двух хроматографических колонок Synergi Max&nbsp;RP (20&nbsp;×&nbsp;2,0&nbsp;мм, 2,5&nbsp;мкм) и&nbsp;Synergi&nbsp;Fusion RP&nbsp;80Å (250&nbsp;×&nbsp;4,6&nbsp;мм, 4&nbsp;мкм). Элюирование проводили в&nbsp;градиентном режиме с&nbsp;применением подвижной фазы на&nbsp;основе метанола и&nbsp;0,1%-го раствора муравьиной кислоты в&nbsp;воде. Для подготовки проб гомогенатов использовалось разведение образцов раствором внутренних стандартов в&nbsp;метаноле. В&nbsp;качестве стабилизатора-антиоксиданта был выбран 5%-й водный раствор аскорбиновой кислоты.Заключение. Разработанная методика прошла полную валидацию и&nbsp;соответствует требованиям российских и&nbsp;международных руководств. Выбранный способ стабилизации позволяет хранить образцы гомогенатов мозга в&nbsp;течение 30&nbsp;дней после отбора.

Acta biomedica scientifica

Обоснование. Определение изменения содержания моноаминовых нейромедиаторов и&nbsp;их&nbsp;метаболитов в&nbsp;структурах головного мозга является необходимой частью изучения...