Количественное определение фоновой экспрессии интерферона бета в культуре клеток сибирской ночницы ( Myotis sibiricus )

<div>Обоснование. Рукокрылые являются хозяевами и переносчиками широкого спектра зоонозов. Исследование иммунного ответа этих млекопитающих на вирусные инфекции необходимо для раскрытия фундаментальных механизмов циркуляции зоонозных инфекций в природе. Существует гипотеза о постоянно «включенной» активности белков интерферонового пути у рукокрылых для противодействия вирусным инфекциям. В этом исследовании мы оценили уровень активности системы врожденного иммунитета в клеточной линии почки сибирской ночницы (Myotis sibiricus, Kastschenko, 1905) MdbK3-14, взяв в качестве маркера экспрессию интерферона бета.Цель исследования. Оценить фоновый уровень экспрессии гена интерферона бета (IFN-β) в неинфицированных клетках Myotis sibiricus. Методы. Культуру клеток MdbK3-14 выращивали в 24-луночных планшетах. Монослои клеток открепляли раствором трипсина и выделяли суммарную РНК. Концентрацию мРНК транскриптов гена IFN-β и референтных генов бета-актина (ACTB) и субъединицы A сукцинатдегидрогеназного комплекса (SDHA) определяли с помощью одностадийной мультиплексной ОТ-рвПЦР и подтверждали с помощью ОТ-цПЦР.Результаты. Разработаны специфичные праймеры с зондом для детекции мРНК гена IFN-β в клетках рукокрылых. Выявлена стабильная детекция транскриптов генов SDHA и IFN-β как в ОТ-рвПЦР (CV = 0,5 % и CV = 0,2 % соответственно), так и в ОТ-цПЦР (CV = 0,8 % и CV = 1,4 % соответственно). Детекция мРНК ACTB в ОТ-цПЦР также проходила равномерно во всех образцах (CV = 0,8  %), однако в ОТ-рвПЦР выявлена некоторая нестабильность для бета-актина (CV = 3,6 %). Результаты количественного определения в ОТ-рвПЦР и ОТ-цПЦР коррелировали между собой. Установлено, что уровень экспрессии IFN-β в клетках MdbK3-14 сопоставим (в ОТ-рвПЦР в среднем 0,97 ± 0,15 отн.ед.) или несколько ниже (в ОТ-цПЦР в среднем 0,13 ± 0,05 отн.ед.), чем экспрессия белков домашнего хозяйства ACTB и SDHA.Заключение. При отсутствии иммунной стимуляции в клетках почки M. sibiricus наблюдается фоновая экспрессия IFN-β. </div>

Acta biomedica scientifica

Myotis sibiricus

клеточные линии

экспрессия

мРНК

SDHA

ACTB

IFN-β

гены «домашнего хозяйства»

количественная ОТ-ПЦР

цифровая ОТ-ПЦР

Обоснование. Рукокрылые являются хозяевами и переносчиками широкого спектра зоонозов. Исследование иммунного ответа этих млекопитающих на вирусные инфекции необходимо для р...

Количественное определение фоновой экспрессии интерферона бета в культуре клеток сибирской ночницы ( Myotis sibiricus )

Авторы

Ляпунова Н.А.

Хаснатинов М.А.

Данчинова Г.А.

Соловаров И.С.

Рекомендуем изучить