Получение хроматографически очищенного противооспенного иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей

Цель работы – получить хроматографически очищенный противооспенный иммуноглобулин из сыворотки крови лошадей и оценить его свойства.
Материалы и методы. В работе использована сыворотка крови лошадей, содержащая антитела к вирусу вакцины, штамм Л-ИВП. Хроматографическую очистку сыворотки проводили на препаративном хроматографе Akta Avant (GE HealthCare, Швеция), контроль молекулярных параметров на стадиях получения иммуноглобулина осуществляли на системе высокоэффективной жидкостной хроматографии LC-20ad (Shimadzu, Япония). Биологические свойства иммуноглобулина оценивали на кроликах, белых мышах, морских свинках. Уровень специфических вируснейтрализующих антител определяли в реакции нейтрализации на хорионаллантоисной оболочке (ХАО) 12-суточных куриных эмбрионов.
Результаты и обсуждение. Разработана технология получения хроматографически очищенного противооспенного иммуноглобулина из сыворотки крови лошади. На начальном этапе иммунную сыворотку крови лошадей очищали фильтрованием через стекловолоконные фильтры кассетного типа от фибринового осадка, остаточного количества липидов и липопротеинов, а затем осаждали иммуноглобулиновую фракцию насыщенным раствором сульфата аммония. На следующем этапе с помощью ионообменной хроматографической очистки из рабочего раствора удаляли соли аммония, низкомолекулярные фракции, остаточные количества альбуминов и эуглобулины. На заключительном этапе, используя гель-фильтрацию, избавлялись от димеров, полимеров и агрегатов иммуноглобулинов. Приготовленные по разработанной технологии опытные серии иммуноглобулина характеризовались высокой степенью очистки. Содержание мономеров в готовом препарате составляло не менее 99 %, а специфическая активность по уровню специфических вируснейтрализующих антител – не менее 1:16000.