Типирование некультивируемых изолятов Coxiella burnetii и Coxiella-подобных микроорганизмов, ассоциированных с клещами, с применением анализа нуклеотидной последовательности гена 16S рРНК

Возбудитель Ку-лихорадки – внутриклеточный патоген Coxiella burnetii – распространен практически по всему миру; в его циркуляции участвует множество видов кровососущих клещей, опасных для животных и человека. С помощью молекулярно-генетических методов обнаружены близкородственные виды микроорганизмов рода&nbsp;Coxiella&nbsp;sp., ряд которых является эндосимбионтами клещей, а некоторые могут выживать в организме человека, вызывая инфекционный процесс. Существование видов, гены которых по нуклеотидной последовательности сходны с генами&nbsp;C. burnetii, затрудняет генодиагностику патогена у членистоногих переносчиков.&nbsp;Цель&nbsp;данной работы – изучение возможности применения ПЦР для молекулярной диагностики и секвенирования протяженного фрагмента гена&nbsp;16S&nbsp;рРНК для дифференциации&nbsp;C. burnetii&nbsp;от&nbsp;Coxiella-подобных микроорганизмов.&nbsp;Материалы и методы.&nbsp;Индивидуальные пробы кровососущих клещей исследовали для обнаружения бактерий рода&nbsp;Coxiella&nbsp;sp. с помощью стандартной ПЦР. Для положительных образцов получали протяженные фрагменты гена&nbsp;16S&nbsp;рРНК и исследовали его с помощью секвенирования и множественного выравнивания с гомологичными последовательностями.&nbsp;Результаты и обсуждение.&nbsp;Из 96 исследованных клещей, собранных на территории Ульяновской области, один был положителен на присутствие ДНК&nbsp;C. burnetii&nbsp;и один – на присутствие ДНК&nbsp;Coxiella&nbsp;sp. Для изолята&nbsp;C. burnetii&nbsp;наибольшее сходство выявлено с западноевропейскими штаммами, для&nbsp;Coxiella-подобного микроорганизма – с близкородственными бактериями из клещей того же вида. Отмечены уникальные полиморфизмы для обнаруженных микроорганизмов. Установлено, что родоспецифичные праймеры к фрагменту гена&nbsp;16S&nbsp;рРНК способны амплифицировать не только бактерии рода&nbsp;Coxiella&nbsp;sp., но и генетически дистанцированные виды. Анализ последовательности протяженного фрагмента гена&nbsp;16S&nbsp;рРНК позволяет дифференцировать&nbsp;C. burnetii&nbsp;от&nbsp;Coxiella-подобных микроорганизмов; некоторые полиморфизмы гена, по-видимому, возникли в процессе микроэволюции в различных географических регионах. В европейской части Российской&nbsp;Федерации&nbsp;Coxiella-подобные бактерии обнаружены впервые.

Проблемы особо опасных инфекций

Coxiella burnetii

Coxiella-подобные микроорганизмы

кровососущие клещи

ПЦР 

ген 16S рРНК 

полиморфизмы

Возбудитель Ку-лихорадки – внутриклеточный патоген Coxiella burnetii – распространен практически по всему миру; в его циркуляции участвует множество видов кровососущих клещ...

Авторы

Панферова Ю.А.

Токаревич Н.К.

Блинова О.В.

Нафеев А.А.

Сибаева Э.И.

Рекомендуем изучить