Прямое количественное определение белковых антигенов в препаратах субъединичных чумных и риккетсиозных вакцин

Цель работы – предложить методические приемы прямого количественного определения специфических белковых антигенов Yersinia pestis и Rickettsia raoultii в препаратах и различных прототипах субъединичных вакцин. Материалы и методы. В качестве модельных использовали антигены Y. pestis LcrV и Caf1, заключенные в субстанцию вакцины чумной молекулярной микроинкапсулированной (ВЧММ ) и раздельно, в микрокристаллы аминокислот, соосажденных с белками чумного микроба. Антигены R. raoultii Adr2, OmpB24, YbgF адсорбировали прототипом субстанции риккетсиозной вакцины. Освобождение чумных антигенов из микрокапсул ВЧММ проводили последовательной обработкой последних органическими растворителями метиленхлоридом и метанолом соответственно, микрокристаллы-носители растворяли 0,1 М натрий-цитратным буфером, рН 6,0. Антигены в прототипе субстанции риккетсиозной вакцины определяли измерением количества белков, не связывающихся с алюмогелем. Количественные параметры, характеризующие содержание антигенов в субстанциях и прототипах вакцинных препаратов, вычисляли в результате обработки цифровых изображений полиакриламидных гелей, полученных электрофорезом фракций белковых антигенов, экстрагированных из носителей. Результаты и обсуждение. Изучены не вызывающие деградацию белка способы прямой экстракции и последующего количественного анализа антигенов Y. pestis LcrV и Caf1 из препаратов субъединичных вакцин на основе микрокристаллов аминокислот и полилактидных микрокапсул. Установлен различный характер связывания LcrV и Caf1 в субстанциях микрокристаллов, при этом количественно определена доля антигенов, освобождающихся из микрокристаллов только в результате их полного растворения. Выявлено, что при низких концентрациях белков LcrV и Caf1, экстрагированных из микрокристаллов, для их уверенной визуализации необходимо концентрирование экстрактов с последующим удалением солей. Подтверждено, что 10 мкг чумных антигенов и белков R. raoultii в объеме дозы введения 200 мкл суспензии достаточно для количественного анализа электрофоретическим методом. Обсуждаются перспективы альтернативных прямой экстракции антигенов иных физико-химических методов оценки состава и качества вакцинных препаратов.