Сравнительный анализ экспрессии основных генов вирулентности у различных штаммов Vibrio сholerae О1

Цель – сравнительное изучение экспрессии основных генов вирулентности у штаммов Vibrio cholerae классического биовара, типичных и генетически измененных штаммов V. cholerae биовара Эль Тор.

Материалы и методы. В качестве модельных использовали природные токсигенные штаммы V. cholerae О1 классического биовара (J89, Пакистан, 1969 г.), типичного (М-887, Астрахань, 1970 г.) и генетически измененного (301, Таганрог, 2011 г.) штаммов биовара Эль Тор. Штаммы выращивали в оптимальных для продукции холерного токсина и токсинкорегулируемых пилей условиях. Исследование роста штаммов проводили на бульоне LB при комнатной температуре с определением количества клеток на спектрофотометре Biowave DNA (Biochrome Ltd., Великобритания). Определение экспрессии генов осуществляли с помощью ПЦР в реальном времени с обратной транскрипцией.

Результаты и обсуждение. Изучена экспрессия структурных (ctxA, tcpA) и регуляторных (toxR, toxT, tcpP, tcpH) генов вирулентности у штаммов холерного вибриона классического биовара, типичного и генетически измененного штаммов биовара Эль Тор. Выявлены значительные различия по времени и уровню максимальной экспрессии указанных генов у штаммов классического и Эль Тор биоваров. Установлено, что экспрессия генов ctxA и toxR у штамма геноварианта достигала своего максимума на 1–3 ч раньше других штаммов. При этом уровень экспрессии гена ctxA соответствовал уровню классического штамма. Максимальная экспрессия гена toxR у штамма геноварианта была выше, чем у типичного Эль Тор и классического штаммов, а также имела четкую обратную корреляцию с экспрессией гена ctxA. Экспрессия генов tcpA, toxT и tcpH у штамма классического биовара достигала максимума на 1–2 ч раньше, чем у штаммов биовара Эль Тор. Указанные различия следует учитывать при проведении научно-исследовательских работ, связанных с изучением экспрессии основных генов вирулентности.