Иммуногенные и протективные свойства рекомбинантного штамма вируса осповакцины, экспрессирующего кассету генов структурных белков вируса Марбург

Цель исследования – создание высокоиммуногенной вакцинной конструкции на основе рекомбинантного варианта репликативно-дефектного штамма вируса осповакцины MVA, экспрессирующего вирусоподобные частицы, имитирующие природную инфекцию вирусом Марбург. Материалы и методы. Рекомбинантный вирус получали путем рекомбинации между гомологичными последовательностями вирусной ДНК и инсерционной плазмиды pDel2-GP-VP-Pat, которая несет трансгены структурных белков GP и VP40 вируса Марбург, фланкированные фрагментами генома штамма MVA. Структуру рекомбинантного вируса подтверждали методами ПЦР и секвенирования, экспрессию трансгенов анализировали методом Вестерн-блот, формирование вирусоподобных частиц фиксировали с помощью электронной микроскопии. Оценку иммуногенности и протективности проводили на модели морских свинок. Титр антител определяли в иммуноферментном анализе. Для оценки Т-клеточного ответа использовали метод внутриклеточного окрашивания цитокинов с последующим анализом образцов на проточном цитофлуориметре. Результаты и обсуждение. На основе высокоаттенуированного штамма MVA вируса осповакцины сконструирован рекомбинантный вариант MVA-GP-VP40-MARV, несущий в районе делеции II генома кассету трансгенов GP и VP40 вируса Марбург. Показана экспрессия трансгенов в пермиссивных для MVA клетках CER, инфицированных рекомбинантным штаммом MVA-GP-VP40-MARV, и секреция белков GP и VP40 вируса Марбург в культуральную среду. Электронно-микроскопический анализ выявил наличие вирусоподобных частиц вируса Марбург в культуральной среде клеток начиная с 12 часов после инфицирования. Двукратная вакцинация морских свинок рекомбинантным штаммом MVA-GP-VP40-MARV в дозе 108 БОЕ /животное индуцировала формирование антител к вирусу Марбург и вирусу осповакцины, а также 100 % защиту от летальной инфекции вирусом Марбург (50 ЛД 50). С использованием оригинального программного обеспечения TEpredict предсказана структура Т-хелперных эпитопов белка GP вируса Марбург. С помощью метода ICS экспериментально подтверждена биологическая активность этих эпитопов и показано, что они обеспечивают индукцию Т-клеточного иммунного ответа в составе вакцинной конструкции MVA-GP-VP40-MARV.

Проблемы особо опасных инфекций

штамм MVA вируса осповакцины

вирусоподобные частицы (ВПЧ )

вирус Марбург (MARV)

поверхностный гликопротеин (GP)

вирионный белок VP40

внутриклеточное окрашивание цитокинов (ICS).

Цель исследования – создание высокоиммуногенной вакцинной конструкции на основе рекомбинантного варианта репликативно-дефектного штамма вируса осповакцины MVA, экспрессирую...

Иммуногенные и протективные свойства рекомбинантного штамма вируса осповакцины, экспрессирующего кассету генов структурных белков вируса Марбург

Авторы

Семенова А.В.

Сиволобова Г.Ф.

Гражданцева А.А.

Пьянков С.А.

Шульгина И.С.

Таранов О.С.

Пьянков О.В.

Антонец Д.В.

Карпенко Л.И.

Старостина Е.В.

Рекомендуем изучить