Получение рекомбинантных антигенов для проведения серологической диагностики лихорадки Марбург

Цель работы – получение рекомбинантных вирусных антигенов основных иммунодоминантных белков: гликопротеина (GPΔMLD), нуклеопротеина (NP) и матриксного белка (VP40) вируса Марбург, а также исследование их антигенных и иммуногенных свойств.

Материалы и методы. Для создания рекомбинантных белков GPΔMLD, NP и VP40 вируса Марбург использовали синтезированные нуклеотидные последовательности, кодирующие эти белки, клонированные в составе экспрессионного вектора pЕТ21a. Иммуногенные и антигенные свойства полученных рекомбинантных белков проверяли с использованием ряда биомоделей (мыши, куры и морские свинки).

Результаты и обсуждение. Получены рекомбинантные плазмиды, содержащие гены, кодирующие белки GPΔMLD, NP, VP40 вируса Марбург, а также штаммы-продуценты Escherichia coli, с выходом очищенных препаратов рекомбинантных белков GPΔMLD, NP, VP40 с одного литра культуральной жидкости – 5, 10 и 10 мкг соответственно. Рекомбинантные белки GP, NP и VP40 MARV при иммунизации мышей вызывают синтез антител с высоким титром (рекомбинантные белки NP и VP40 – более 409600, а рекомбинантный белок GPΔMLD – 12800). Мышиные антитела, специфичные к рекомбинантным белкам, взаимодействуют в иммуноферментном анализе с антигеном инактивированного MARV. Антитела кур, иммунизированных вирусоподобными частицами, содержащими на поверхности поверхностный гликопротеин вируса Марбург, и антитела морских свинок, иммунизированных экспериментальной ДНК-вакциной, содержащей ген GPΔMLD MARV, узнают рекомбинантный белок GPΔMLD и вирусный белок в составе инактивированного MARV. Полученные рекомбинантные белки обладают иммуногенностью/антигенностью и могут использоваться для разработки иммуноферментных тест-систем.