Электрооптический анализ жизнеспособности клеток вакцинного штамма туляремийного микроба

Цель. Изучить возможность применения электрооптического анализа для оценки жизнеспособности клеток вакцинного штамма туляремийного микроба на этапах получения экспериментальной живой туляремийной вакцины.

Материалы и методы. Объектом исследования стала культура клеток Francisella tularensis 15 НИИЭГ. Исследования проводились на всех этапах получения экспериментальной живой туляремийной вакцины по усовершенствованной технологии: выращивание, концентрирование, диафильтрация, сведение со средами высушивания, стабилизация, хранение (срок наблюдения два года). Электрооптический анализ по показателю «анизотропия поляризуемости» бактериальной клетки производился с помощью устройства EloTrace (EloSystems, Германия). Общую концентрацию клеток измеряли денситометрически при 590 нм и спектрометрически при 650 нм, оценку жизнеспособности проводили высевом на пластинки с FT-агаром.

Результаты и обсуждение. В ходе эксперимента показано, что изменение анизотропии поляризуемости клетки при частотах 900 кГц и 2100 кГц, отражающее состояние цитоплазмы и цитоплазматической мембраны соответственно является самым ранним ответом на изменения жизненных показателей бактериальной культуры в процессе выращивания. В свою очередь, снижение жизнеспособности клеток F. tularensis происходило гораздо раньше, чем снижение концентрации клеток. Показано сохранение жизнеспособности клеток F. tularensis 15 НИИЭГ на всех этапах получения экспериментальной живой туляремийной вакцины. Электрооптический анализ позволяет регистрировать изменения жизненных показателей клеток микроорганизма в режиме реального времени, тогда как оценка жизнеспособности бактериологическим методом занимает 5 сут. Различные этапы производства туляремийной вакцины влияют на жизненные показатели клеток F. tularensis, а электрооптический анализ является перспективным методом контроля показателя «Специфическая активность (количество живых микробных клеток)».