Test

Использование реакции латекс-агглютинации в ускоренном определении патогенных буркхольдерий

Цель. Разработка препарата для идентификации Burkholderia pseudomallei и Burkholderia mallei, выращенных на плотной питательной среде, на этапе экспресс-диагностики патогенных булькхольдерий. Материалы и методы. За основу взят метод латекс-агглютинации, в котором в качестве носителя агглютининов применяют взвеси полимеров. Агент, распознающий антиген клеток-мишеней, представлял собой моноклональные антитела, направленные к эпитопам гликопротеина капсулы возбудителя мелиоидоза. жидкий латексный диагностикум готовили из взвеси полимерного полистирола с диаметром микросфер 0,8-1,1 мкм, поверхность которого нагружали предварительно подобранной концентрацией антител. В работе использовали типичные штаммы возбудителей мелиоидоза и сапа с полноценной антигенной структурой, а также близкородственные и гетерологичные микроорганизмы. Из бактериальных культур готовили взвеси с концентрацией 1,0·109 м.к./мл. Реакцию проводили на подогретых до 37 °С стеклянных чашках Петри с визуальной регистрацией результатов по 4-крестовой системе. Результаты и обсуждение. Реакция латекс-агглютинации основана на агглютинации микробных клеток (B. pseudomallei и B. mallei) моноклональными антителами, узнающими эпитопы гликопротеина капсулы патогенных буркхольдерий. проверено 14 моноклональных антител различных по классу и эпитопной направленности. определяющими факторами для выбора антитела являлись специфичность их в реакции агглютинации со штаммы возбудителей мелиоидоза и сапа, а также сохранение агглютинирующей активности после иммобилизации на полимерном носителе. в итоге, в качестве агента, распознающего антиген клеток-мишеней, выбрали моноклональные антитела иммуноглобулина класса G к эпитопам гликопротеина капсулы (АГ 8) возбудителя мелиоидоза. в результате после смешивания проб с диагностикумом в образцах, содержащих бактерии B. pseudomallei и B. mallei, через 10-15 мин образовывался агглютинат, видимый невооруженным глазом. Пробы с близкородственными и гетерологичными микроорганизмами агглютината не имели и регистрировались как отрицательные. Полученный диагностикум характеризуется высокой специфичностью.

Проблемы особо опасных инфекций

Цель. Разработка препарата для идентификации Burkholderia pseudomallei и Burkholderia mallei, выращенных на плотной питательной среде, на этапе экспресс-диагностики патоген...