Композиционный состав везикул атоксигенных штаммов Vibrio cholerae O1 El Tor и O139 серогрупп

Цель работы – изучение композиционного состава препаратов везикул (OMV) у штаммов Vibrio cholerae O1 El Tor (ctxAB– tcpA– ; ctxAB– tcpA+ ) и О139 (ctxAB– tcpA– ) серогрупп, выделенных из различных источников. Материалы и методы. В работе использовали штаммы V. cholerae серогрупп О1 и О139, из которых были получены препараты OMV. Методом трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ) изучали строение препаратов OMV. Полногеномное секвенирование ДНК проводили на платформе MiSeq. Нуклеотидные и соответствующие аминокислотные последовательности генов изучали c помощью биоинформационного анализа. Белковое профилирование проводили с помощью MALDI-TOF масс-спектрометрии. Ферментативные активности детектировали с использованием соответствующих сред и субстратов. Определение (поверхностных детерминант) липополисахарида (ЛПС) и белков наружной мембраны в составе OMV осуществляли методом иммуноферментного анализа. Анализ спектра жирных кислот (ЖК) проводили методом газожидкостной хроматографии масс-спектрометрии. Результаты и обсуждение. Получены препараты OMV из атоксигенных штаммов холерных вибрионов. ТЭМ выявлено, что OMV представлены структурами сферической формы около 40–200 нм. По данным полногеномного секвенирования установлено, что в составе OMV обнаружены фрагменты хромосом, содержащие гены штаммов V. cholerae серогрупп O1 и O139, из которых они выделены. Проведенный биоинформационный анализ выявил отличия в структуре гена ompT у исходных штаммов и у OMV, полученных из штаммов V. cholerae серогрупп O1 и O139. Ген ∆ompT препарата OMV V. cholerae O139-серогруппы был трункирован и образовывал пептид в 17 аминокислотных остатков (-LENHHQKNREPDKEFPY-). Анализ композиционного состава OMV выявил наличие в их составе ферментов (N-ацетил-β-D-глюкозаминидазы и ДНК-азы), белков наружных мембран (OmpT и OmpU), ЛПС, насыщенных, сis/trans-изомеров ненасыщенных ЖК и разветвленных ЖК. Обнаружены различия в композиционном составе OMV, полученных из атоксигенных штаммов V. cholerae серогрупп О1 и О139.