Разработка способа детекции жизнеспособных холерных вибрионов путем определения нарастания титра специфического бактериофага с помощью ПЦР-РВ

Цель – разработка непрямого метода определения жизнеспособных холерных вибрионов путем оценки нарастания титра специфического бактериофага, детектируемого в ПЦР-РВ.
Материалы и методы. Для исследования взят холерный бактериофаг Rostov М3 (миовирус класса Caudoviricetes; GenBank: MN379460.1- MN379463.1). Изучение биологических свойств фага проводили общепринятыми методами с небольшими модификациями. Праймеры для амплификации фага сконструированы с помощью https://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0. Культивирование проб, содержащих жизнеспособные и нежизнеспособные Vibrio cholerae, с бактериофагом осуществляли в 1 % пептонной воде в течение времени Т₀ и Т_n. Результат ПЦР выражали в числе фаговых частиц на 1 мл образца или величиной Ср.
Результаты и обсуждение. Бактериофаг Rostov М3 имеет высокую скорость адсорбции и урожайность, а также обладает широким спектром литической активности в отношении V. cholerae О1 Classical и El Tor. В процессе накопления частиц фага Rostov М3 фиксировали снижение величины Cp при инкубировании пробы не менее двух часов. В этом случае делается заключение о присутствии в пробе жизнеспособных холерных вибрионов. Используя данный метод, можно выявить бактериальные клетки, находящиеся в живом, но некультивируемом состоянии, так как фаги способны к размножению в клетках этого фенотипа. Применение метода на инактивированных культурах (негативный контроль) V. cholerae не показало нарастания количества частиц фага относительно нулевой точки, что позволяет сделать вывод об отсутствии в образце жизнеспособных клеток. Авторами предложен метод, который позволяет установить разницу в уровнях накопления фаговых частиц при исследовании проб, содержащих живые и неживые бактерии V. cholerae О1, в контакте с бактериофагом Rostov М3 в течение определенного времени Т₀ и Т_n. Разработанная методика позволяет расширить возможности косвенного обнаружения жизнеспособных V. cholerae О1 Classical и El Tor в зараженных объектах.