Сравнительная характеристика конститутивной и индуцибельной систем экспрессии белка L1 вируса папилломы человека 18 типа в Kluyveromyces lactis

Обоснование. Использование профилактических вакцин против ВПЧ показало эффективность в снижении заболеваемости раком шейки матки. Дрожжи Kluyveromyces lactis являются перспективной платформой для получения рекомбинантных вакцинных антигенов благодаря статусу GRAS, наличию эукариотической системы посттрансляционных модификаций и низкой стоимости питательных сред.Цель исследования. Разработка штамма-продуцента на основе Kluyveromyces lactis для получения рекомбинантного белка L1 вируса папилломы человека 18 типа.Материалы и методы. Для экспрессии гена L1 ВПЧ 18 типа сконструированы два интеграционных вектора. Первый – pPOG-HPV18 с конститутивным промотором GAP, второй – pKB-HPV18 с индуцибельным промотором LAC4. Полученными векторами трансформировали клетки K. lactis методом электропорации. Культивирование рекомбинантных штаммов проводили на среде YEPm. Индукцию синтеза белка для штамма K. lactis / pKB-HPV18 проводили с помощью лактозы. Целевой белок из клеточных лизатов выделяли методом ионообменной хроматографии (SP Seplife). Идентификацию белка проводили с помощью хромато-масс-спектрометрии. Эксперименты выполнены в трех биологических повторностях. Статистическую значимость различий оценивали с использованием t-критерия Стьюдента (p &lt; 0,05).Результаты. Получены штаммы-продуценты для обеих конструкций. Выход биомассы для K. lactis / pPOG-HPV18 составил 20 г/л, для K. lactis / pKB-HPV18 – 34 г/л. Степень чистоты целевого белка после одной стадии очистки достигла 70–80 % для конститутивной системы и приблизилась к 90 % для индуцибельной системы. Методом хромато-масс-спектрометрии подтверждена идентичность и структурная целостность полученного белка.Заключение. Сконструированы два штамма-продуцента K. lactis, обеспечивающие синтез белка L1 ВПЧ 18 типа. Система с индуцибельным промотором LAC4 показала более высокий выход биомассы и степень чистоты целевого белка по сравнению с конститутивной системой. Полученные результаты создают основу для дальнейшей разработки доступной системы продукции вакцинного антигена ВПЧ 18 типа.

Acta biomedica scientifica

Kluyveromyces lactis

вирус папилломы человека

ВПЧ 18 типа

рекомбинантный белок L1

экспрессия

индуцибельный промотор

вирусоподобные частицы

Обоснование. Использование профилактических вакцин против ВПЧ показало эффективность в снижении заболеваемости раком шейки матки. Дрожжи Kluyveromyces lactis являются персп...

Сравнительная характеристика конститутивной и индуцибельной систем экспрессии белка L1 вируса папилломы человека 18 типа в Kluyveromyces lactis

Authors

Рар А.А.

Волосникова Е.А.

Беленькая С.В.

Гогина Я.С.

Щербаков Д.Н.

We recommend that you study