Получение и характеристика гибридом-продуцентов моноклональных антител к антигенам коронавируса SARS-CоV-2

Цель работы – получить и охарактеризовать гибридомы-продуценты моноклональных антител к антигенам коронавируса SARS‑CoV‑2, перспективных для конструирования диагностических иммунохимических тестов.&nbsp;Материалы и методы.&nbsp;Для иммунизации мышей линии BALB/c использовали рекомбинантные антигены NP и RBD SARS-CоV-2. Антигенные препараты сорбировали на геле алюминия гидроксида и вводили подкожно мышам линии BALB/c с интервалом 7 дней. Слияние иммунных спленоцитов с клетками миеломной опухоли SP2/0-Ag14 проводили с помощью ПЭГ -1450. Отбор гибридом, секретирующих анти-NP- и анти-RBD-антитела, проводили методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) в 96-луночных планшетах с сорбированными препаратами NP и RBD. Для клонирования гибридом использовали метод предельных разведений. Изучение секреторных свойств полученных клонов проводили при культивировании&nbsp;in vitro&nbsp;в 24-луночных культуральных планшетах. Иммуноасцитические жидкости получали при культивировании гибридных клеток в брюшной полости мышей линии BALB/c. Моноклональные антитела очищали методом аффинной хроматографии на сорбенте протеин А-сефарозе, конъюгировали с пероксидазой хрена и проверяли возможность использования в сэндвич-варианте ИФА для детекции инактивированного коронавируса SARS-CоV-2 штамма «Изолят В».&nbsp;Результаты и&nbsp;обсуждение.&nbsp;В результате гибридизаций и отбора клонов получены гибридомы-продуценты моноклональных антител к NP и RBD коронавируса SARS-CоV-2. При культивировании&nbsp;in vitro&nbsp;и&nbsp;in vivo&nbsp;клоны характеризовались стабильностью пролиферативной и антителопродуцирующей активности. Использование моноклонального антитела 415D12 в качестве захватывающего и конъюгированного с пероксидазой хрена 411D12 в качестве детекторного моноклонального антитела в ИФА позволяет выявить коронавирус SARS-CоV-2 в минимальной концентрации 1·103 БОЕ /мл.

Проблемы особо опасных инфекций

коронавирус SARS-CоV-2

гибридомы

моноклональные антитела

иммуноферментный анализ

Цель работы – получить и охарактеризовать гибридомы-продуценты моноклональных антител к антигенам коронавируса SARS‑CoV‑2, перспективных для конструирования диагностических...

Получение и характеристика гибридом-продуцентов моноклональных антител к антигенам коронавируса SARS-CоV-2

Authors

Куклина Г.В.

Ипатов С.С.

Горшков А.С.

Печенкин Д.В.

Еремкин А.В.

Кузнецовский А.В.

Туманов А.С.

Дармов И.В.

We recommend that you study