Тест-система для идентификации типичных и генетически измененных вариантов холерных вибрионов биовара Эль Тор методом ПЦР в режиме реального времени

Цель работы – анализ и оценка результатов ПЦР -тест-системы «Гены V. cholerae вариант ctxB-rtxC, FL» для идентификации Vibrio cholerae O1 с дифференциацией на типичные токсигенные и генетически измененные варианты в мультиплексном формате с гибридизационно-флуоресцентным методом учета результатов в режиме реального времени. Материалы и методы. Для достижения указанной цели в работе представлен набор реагентов ПЦР -тест-системы «Гены V. cholerae О1 вариант ctxB-rtxC, FL», а также способ осуществления идентификации V. cholerae O1 с дифференциацией на типичные токсигенные и генетически измененные варианты. Изучены специфичность, специфическая активность и чувствительность разработанной тест-системы на 35 штаммах V. cholerae O1, 6 штаммах V. cholerae non O1, 5 гетерологичных штаммах (Shigella zonnei – 2 штамма, по одному штамму Salmonella typhimurium, S. enteritidis, Escherichia coli). Результаты и обсуждение. Набор реагентов ПЦР -тест-системы «Гены V. cholerae вариант ctxB-rtxC, FL» выявляет в геноме токсигенных V. cholerae О1 фрагменты ДНК генов ctxBСl, ctxBEl, rtxC (обладает специфической активностью, аналитическая чувствительность 1∙103 ГЭ /мл) и не обнаруживает данные гены у нетоксигенных V. cholerae О1 и non O1, а также у гетерологичных штаммов микроорганизмов (показана специфичность 100 %). На ПЦР -тест-систему «Гены V. cholerae вариант ctxB-rtxC, FL» получен патент РФ № 2732448, опубл. 24.08.2020, бюл. № 24. ПЦР -тест-система «Гены Vibrio cholerae О1 вариант ctxB-rtxC, FL» может быть использована для повышения эффективности системы эпидемиологического надзора за холерой и проведения обоснованного объема противоэпидемических мероприятий в случае ее завоза на территорию Российской Федерации.