Иммуногенные и протективные свойства рекомбинантного штамма вируса осповакцины, экспрессирующего кассету генов структурных белков вируса Марбург

Цель исследования – создание высокоиммуногенной вакцинной конструкции на основе рекомбинантного варианта репликативно-дефектного штамма вируса осповакцины MVA, экспрессирующего вирусоподобные частицы, имитирующие природную инфекцию вирусом Марбург. Материалы и методы. Рекомбинантный вирус получали путем рекомбинации между гомологичными последовательностями вирусной ДНК и инсерционной плазмиды pDel2-GP-VP-Pat, которая несет трансгены структурных белков GP и VP40 вируса Марбург, фланкированные фрагментами генома штамма MVA. Структуру рекомбинантного вируса подтверждали методами ПЦР и секвенирования, экспрессию трансгенов анализировали методом Вестерн-блот, формирование вирусоподобных частиц фиксировали с помощью электронной микроскопии. Оценку иммуногенности и протективности проводили на модели морских свинок. Титр антител определяли в иммуноферментном анализе. Для оценки Т-клеточного ответа использовали метод внутриклеточного окрашивания цитокинов с последующим анализом образцов на проточном цитофлуориметре. Результаты и обсуждение. На основе высокоаттенуированного штамма MVA вируса осповакцины сконструирован рекомбинантный вариант MVA-GP-VP40-MARV, несущий в районе делеции II генома кассету трансгенов GP и VP40 вируса Марбург. Показана экспрессия трансгенов в пермиссивных для MVA клетках CER, инфицированных рекомбинантным штаммом MVA-GP-VP40-MARV, и секреция белков GP и VP40 вируса Марбург в культуральную среду. Электронно-микроскопический анализ выявил наличие вирусоподобных частиц вируса Марбург в культуральной среде клеток начиная с 12 часов после инфицирования. Двукратная вакцинация морских свинок рекомбинантным штаммом MVA-GP-VP40-MARV в дозе 108 БОЕ /животное индуцировала формирование антител к вирусу Марбург и вирусу осповакцины, а также 100 % защиту от летальной инфекции вирусом Марбург (50 ЛД 50). С использованием оригинального программного обеспечения TEpredict предсказана структура Т-хелперных эпитопов белка GP вируса Марбург. С помощью метода ICS экспериментально подтверждена биологическая активность этих эпитопов и показано, что они обеспечивают индукцию Т-клеточного иммунного ответа в составе вакцинной конструкции MVA-GP-VP40-MARV.