Оценка эффективности детекции генетических детерминант Vibrio cholerae в системе мониторинга вибриофлоры водных объектов

Цель – оценка эффективности применения ПЦР-скрининга генетических детерминант Vibrio cholerae в пробах из поверхностных водоемов для оптимизации системы микробиологического мониторинга холеры.Материалы и методы. Исследование проводилось в рамках мониторинга вибриофлоры поверхностных водоемов Иркутска. Дизайн исследования предусматривал: 1) ПЦР-скрининг генетических детерминант V. cholerae в обогащенных на питательных средах (1 % пептонная вода) пробах из поверхностных водоемов в период мониторинга (824 пробы); 2) изучение динамики накопления ДНК V. cholerae при исследовании в ПЦР проб из поверхностных водоемов в процессе культивирования на средах обогащения (16 проб в динамике); 3) экспериментальное исследование детектируемых концентраций холерного вибриона в пробах из поверхностных водоемов. Проводилась индикация видоспецифических (hlyA, toxR) и серогруппоспецифических (wbeT, wbfR) детерминант V. cholerae в ПЦР c гибридизационно-флуоресцентной и электрофоретической детекцией.Результаты и обсуждение. На первом этапе установлено, что удельный вес положительных по результатам ПЦР-скрининга проб (33,9 %) превысил процент положительных проб при бактериологическом исследовании (19,3 %) (t=6,6; p&lt;0,01). При оценке динамики накопления ДНК зарегистрировано снижение порогового цикла (Ct) в 1,2–5,2 раза, свидетельствующее о нарастании концентрации холерного вибриона и доказывающее выявление при ПЦР-скрининге генетических детерминант жизнеспособных форм микроорганизма. Расширенное исследование ПЦР-положительных бактериологически отрицательных проб позволило дополнительно выделить четыре культуры V. cholerae. Однако в эксперименте с искусственно контаминированными холерным вибрионом образцами воды, в отличие от анализа обогащенных нативных проб, не выявлено различий чувствительности ПЦР-скрининга и бактериологического анализа, что может быть обусловлено особенностями метаболизма и адаптации микроорганизма в разных условиях среды. Результаты комплексного исследования свидетельствуют об эпидемиологической эффективности ПЦР-скрининга, что дает основание рекомендовать его применение в лабораториях федерального, регионального и территориального уровней при мониторинговых исследованиях вибриофлоры проб из объектов окружающей среды после их предварительного обогащения на жидких питательных средах.

Проблемы особо опасных инфекций

Vibrio cholerae

эпидемиологический надзор

мониторинг

поверхностные водоемы

молекулярно-генетический анализ

ПЦР-скрининг

Цель – оценка эффективности применения ПЦР-скрининга генетических детерминант Vibrio cholerae в пробах из поверхностных водоемов для оптимизации системы микробиологического...

Оценка эффективности детекции генетических детерминант Vibrio cholerae в системе мониторинга вибриофлоры водных объектов

Authors

Миронова Л.В.

Пономарева А.С.

Басов Е.А.

Федотова И.С.

Хунхеева Ж.Ю.

Фортунатова А.В.

Бочалгин Н.О.

Гладких А.С.

Урбанович Л.Я.

Балахонов С.В.

We recommend that you study