Авирулентный пробиотический штамм Escherichia coli , продуцирующий B-субъединицу холерного токсина: получение, стабильность наследования и экспрессия клонированного гена ctxB

Цель исследования – получение продуцента B-субъединицы холерного токсина на основе авирулентного пробиотического штамма Escherichia coli M-17, изучение его молекулярно-генетических и иммуногенных свойств.

Материалы и методы. Использовали генетически маркированный штамм E. coli KS164 thy polA (pIEM3), содержащий рекомбинантную плазмиду с клонированным геном ctxB, кодирующим B-субъединицу холерного токсина, и авирулентный штамм Е. coli M-17, применяемый для производства колисодержащих пробиотиков. Анализ штаммов проводили различными методами: молекулярно-генетическими, биохимическими и иммунологическими.

Результаты и обсуждение. При введении методом конъюгации в клетки штамма Е. coli M-17 рекомбинантной коинтегратной плазмиды pIEM3(Km^RTc^R) с клонированным геном ctxB получены трансконъюганты Km^RTc^R с высоким уровнем продукции секретируемой B-субъединицы холерного токсина (10 мкг/мл), один из которых (КМ147) взят в качестве штамма-продуцента этого протективного антигена. Показано, что сконструированный штамм Е. coli KM147(pIEM3) Km^RTc^R стабильно наследует клонированный ген ctxB в составе рекомбинантной плазмиды, способен к образованию антитоксических антител у иммунизированных животных и безопасен для модельных животных. Совокупность этих свойств определяет перспективность его дальнейшего использования при конструировании профилактических и диагностических холерных препаратов.